U kemiji, biologiji i medicini, pipeta je tipičan laboratorijski instrument koji se koristi za isporuku unaprijed određenog volumena tekućine, često kao dozator medija. Uspjeh vaših rezultata pipetiranja ovisi o tome koliko točno očitavate volumen pipete prilikom izvođenja delikatnih studija. Korištenje preciznih visokokvalitetnih instrumenata najbolji je način da se osigura ispravno očitavanje volumena pipete. Kako laboratorijski zahtjevi za točnošću i preciznošću nastavljaju rasti, razumijevanje i usavršavanje idealnih tehnika pipetiranja je ključno.
Pipete se koriste u znanstvenim istraživanjima i zahtijevaju visoku preciznost za ispravno mjerenje i prijenos malih količina tekućine.
Međutim, kvar opreme ili pogreška rukovatelja mogu biti uzrok pogrešaka u mjerenju pipete. Sve promjene u ispuštenom volumenu mogu utjecati na rezultate i ponovljivost eksperimenata, kao što su oni qPCR-a.
Čimbenici koji utječu na točnost pipete:
Temperatura
Na točno pipetiranje uvelike utječe temperatura. Temperaturna razlika između uređaja za isporuku i tekućine najutjecajniji je čimbenik. Učinci toplinskog širenja specifični za svaki slučaj javljaju se u zračnom rasporu (mrtvi volumen zraka) između površine tekućine i klipa. Među ostalim posljedicama, to može smanjiti ili povećati količinu tekućine uvučenu u vrh.
Gustoća
Na količinu tekućine koja se uvuče u vrh utječe gustoća (omjer mase/volumena). Usisava se tekućina manje gustoće od sličnog postupka s vodom. Za tekućine manje gustoće rezultati su suprotni. To je uzrokovano fleksibilnim mrtvim volumenom zraka i Zemljinom gravitacijom. Gustoća tekućine također se mijenja s temperaturom. Tipično, gustoća tekućine također se mijenja s temperaturom. Na 20 stupnjeva /68 stupnjeva F, voda obično ima gustoću od 0.998 kg/dm3, etanol ima gustoću od 0.79 kg/dm3, a sumporna kiselina (95-98% h2SO4) ima gustoću 1,84 kg/dm3.
visoko
Na točnost utječu tlak zraka i zemljopisna visina. Što je veća nadmorska visina, to je niži tlak zraka i niži faktor pretvorbe.
Osim toga, vrelišta nekih tekućina značajno padaju do temperature blizu sobne, čime se znatno povećavaju gubici isparavanjem.
Isparavanje reagensa
Vrlo hlapljivi reagensi apsorbiraju paru koja ulazi u vrh i podiže unutarnji tlak. Stoga dolazi do pogrešaka kada se tekućina istiskuje zbog povećanog tlaka.
Odabran je pogrešan način pipetiranja
Tijekom pipetiranja operateri često donose nasumične ili subjektivne odluke o tome hoće li koristiti način rada unatrag ili naprijed. Međutim, samo bi viskozni uzorci trebali koristiti obrnuti način. U obrnutom načinu rada, klip je potpuno pritisnut (nakon prvog graničnika) za aspiraciju uzorka, a zatim samo djelomično pritisnut (do prvog graničnika) za isporuku uzorka. Stoga će korištenje naprijed načina s viskoznim tekućinama rezultirati premalom isporukom, dok će korištenje obrnutog načina s vodenim otopinama rezultirati prekomjernom isporukom.
Nagibno pipetiranje
Gubitak uzorka nastaje kada vrh pipete dodiruje stijenku spremnika tijekom aspiracije. Osim toga, pri pipetiranju malih količina, povlačenje pipete pod kutom može uzrokovati promjene volumena zbog učinaka površinske napetosti. Izvlačenje pipete izravno iz spremnika smanjuje pogreške.